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军团菌检测方法
军团菌检测方法
一、军团菌简介
军团菌是一种环境感染性致病菌,可引起急性呼吸道传染病,即军团菌病。军团菌分布极其广泛,医院、酒店等的供水系统、空调的冷却系统等各种水源均易于滋生、污染军团菌,并造成军团菌病传染的风险。即与水有关的地方均可能存在军团菌。军团菌传播、感染有以下特点:
1、透过空气、水份感染,传播带季节性,超过50%病例在夏季发生。
2、滋生在医院、酒店的供水系统,通过过水龙头、浴室传播。
3、可通过空调的冷却系统,由通风口传播并感染对象。
军团菌属革兰氏阴性杆菌,专性需氧,无芽孢,无荚膜,军团菌需要半胱氨酸和铁,无半胱氨酸时,军团菌无法生长。生化特征还有不发酵也不氧化糖类,不还原硝酸盐,氧化酶实验阴性或弱阳性,尿素酶阴性,军团菌生长的最适pH为6.9-7.0,2%-5%CO2能促进部分菌株的生长。军团菌生长缓慢,易于被其它菌落覆盖。军团菌的菌落颜色多样,通常呈白色、灰色、蓝色或紫色,也能显深褐色、灰绿色、深红色。菌落整齐,表面光滑,在紫外灯下,有荧光。军团菌属有41个种,61个血清型。侵肺军团菌(Legionella pneumophila, LP)有

15个血清型,是引起军团菌病的主要菌型(占80%以上)。军团菌病是一种急性呼吸道传染病,临床类型目前至少有肺炎型与庞蒂阿克热型。本病主要为呼吸道飞沫(气溶胶)传播。目前尚无证据表明感染者、病人或感染动物作为本病的传染源,通常把传染本菌的水源(天然水、人工管道水源、冷却塔、冷热管道系统水等)作为传染源。

二、军团菌的检测方法——ISO11731:1998 
1.范围
本标准描述了一种用于军团菌分离和估计环境样品中军团菌数量的培养方法。
该方法适用于所有环境样本,包括饮用水、工业用水和天然水以及沉淀物、沉积物和粘土/软泥等相关样本。
2.培养基和试剂
2.1 BCYE培养基(也可用硝酸铁琼脂代替) 
2.2 BCYE-Cys(不含L-半胱氨酸) 
2.3 GVPC培养基
2.4酸处理缓冲液
3.取样
3.1取样容器
水样可采用玻璃、聚乙烯或类似容器。以前用过的容器应该清洗干净、扣干水分,121℃高压灭菌15min。如果容器不能经受高压灭菌,应在高于70℃的流动热水或流动蒸汽中处理至少5min。
3.2含生物防腐剂的样品
如果水样中含有或被认为含有氧化型生物防腐剂,应在取样时或取样前加入非活性试剂加以中和。如果水样中含有消毒剂,需在采样前或采样后加入中和剂,含氯或氧化型消毒剂可用硫代硫酸钠或硫代硫酸钾作中和剂。
原则上讲,实验室接到水样后应尽快进行微生物学分析,最好是取样当天,尤其对于已知含生物防腐剂的样品。因此,建议从样品采集到制备好浓缩样的间隔最好为2d,不应超过5d,最长不超过14d。
3.3样品运输

样品应在6-18℃条件下被运输,应避免热和光照,最好在1d内,不超过2d将样品送到指定实验室。

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